中文简体
Olet juuri suorittanut gradienttimenetelmän, joka toimi täydellisesti viime viikolla. Kalibrointistandardit näyttävät puhtailta, mutta näytekromatogrammi näyttää ylimääräisen huipun 23,8 minuutin kohdalla. Vaihdat kolonnin, valmistat uuden puskurin ja tarkistat ilmaisimen. Huippu on edelleen olemassa. Sitten vaihdat liikkuvaan vaiheeseen menevän veden, ja artefakti katoaa. Tämä on korkean erotuskyvyn nestekromatografian todellisuus: veden puhtaus on jokaisen erotuksen alla, ja kun se muuttuu, menetelmä muuttuu sen mukana.
Veden puhtaus vaikuttaa HPLC-tietojen laatuun neljällä käytännöllisellä tavalla: perusviivan stabiilisuus, piikin muoto, retention toistettavuus ja instrumentin käyttöikä. Mukana olevat kontaminantit voivat olla orgaanisia molekyylejä, liuenneita ioneja, hiukkasia tai mikrobeja. Pienikin määrä yhdenlaista epäpuhtautta voi aiheuttaa sen pitoisuuteen nähden suhteettomia seurauksia.
Veden puhtauden tärkeimmät vaikutukset HPLC:hen
HPLC-järjestelmässä vesi on reagenssi, ei passiivinen tausta. Se kuljettaa puskuria, liuottaa näytteen ja edistää ilmaisimen taustaa. Siksi vedessä olevat epäpuhtaudet siirtyvät suoraan analyyttiseen signaaliin. Alla olevassa taulukossa on yhteenveto yleisimmistä epäpuhtauksista ja niiden vaikutuksista.
| Epäpuhtaus | Esimerkkejä tai lähde | Vaikutus HPLC:ssä |
|---|---|---|
| Liuenneet orgaaniset aineet | Humusaineet, pehmittimet, puhdistusjäämät, liuotinhöyryt | UV-säteilyä absorboivat haamuhuiput, perusviivan ajautuminen, retentiomuutokset |
| Epäorgaaniset ionit | Natrium, kloridi, silikaatti, hivenmetallit | Johtavuuden muutokset, häiriöt ionikromatografiassa ja LC-MS:ssä, metalliin liittyvä piikin leveneminen |
| Hiukkaset | Hartsi hienojakoista, pölyä, sakkaa | Tukkeutunut fritti, nouseva vastapaine, pumpun tiivisteen kuluminen, äänekäs perusviiva |
| Liuenneet kaasut | Happi, hiilidioksidi, typpi | Kuplia ilmaisimessa, perusviivapiikit, pH-poikkeama |
| Mikro-organismit | Bakteerit ja biofilmit säilytysastioissa | Kolonnin likaantuminen, tukkeutuneet frittit, vääriä piikit, menetelmän epävakaus |
Nämä vaikutukset eivät ole vain teoreettisia. Vesisäiliössä oleva mikrobibiofilmi voi vapauttaa UV-säteilyä absorboivia metaboliitteja, ja kun tämä kalvo on muodostunut, pelkkä veden vaihtaminen ei välttämättä ratkaise ongelmaa ennen kuin säiliö on puhdistettu ja desinfioitu.
Mitä "HPLC-luokan" ja tyypin 1 vesi todellisuudessa tarkoittavat
Useimmat analyyttiset menetelmät vaativat vettä, joka täyttää tyypin 1 vaatimukset. Käytännössä tämä tarkoittaa, että resistanssi 25 celsiusasteessa on noin 18,2 megohm-senttimetriä, johtavuus on lähellä 0,055 mikrosiemensiä senttimetriä kohti ja orgaanisen hiilen kokonaismäärä on tarpeeksi alhainen, jotta vesi ei luo näkyvää UV- tai MS-taustaa. Pelkkä resistanssi ei riitä. Sinun on myös tiedettävä TOC-taso, hiukkasmäärä ja joissakin sovelluksissa silikaatti- tai natriumarvot.
Puhdistetun veden pH ei ole hyödyllinen määritys. Ultrapuhtaalla vedellä ei ole lähes lainkaan puskurointikykyä, ja se imee nopeasti hiilidioksidia ilmasta, joten mitattu pH noin 5,6 heijastaa vain liuennutta CO2:ta. pH, jolla on merkitystä, on valmistamasi puskuroidun liikkuvan faasin pH.
Veden laatuvaatimukset riippuvat myös ilmaisimesta. UV-ilmaisu aallonpituudella 210 nm on erityisen herkkä orgaaniselle kontaminaatiolle, koska monet hiili-happi- ja hiili-typpisidokset absorboituvat siellä. LC-MS tarvitsee vettä, jossa on erittäin vähän haihtumattomia epäpuhtauksia ionisuppression ja additiotuotteiden muodostumisen välttämiseksi. Haihtumaton kontaminaatio vaikuttaa samalla tavalla haihtumisilmaisimiin, koska se nostaa taustasignaalia. Tyypin 1 vesi on siksi hyvä lähtökohta lähes jokaiselle HPLC-sovellukselle.
Pullotettu HPLC-laatuinen vesi voi toimia, mutta se on säilytettävä ja käsiteltävä oikein. Tarkista analyysitodistus, kirjaa eränumero ylös äläkä koskaan oleta, että vanhassa säiliössä ei ole biologista kasvua.
Gradienttieluointi tekee veden epäpuhtaudet näkyväksi
Veden epäpuhtaudet näkyvät parhaiten gradienttimenetelmissä. Isokraattisessa ajossa UV-säteilyä absorboiva kontaminantti voi yksinkertaisesti nostaa perusviivaa hieman. Gradientissa vesifraktio alkaa korkealla ja orgaaninen liuotinjae nousee ajan myötä. Epäpuhtaudet voivat jäädä kolonnin päähän ja sitten eluoitua orgaanisen pitoisuuden kasvaessa. Tämä tuottaa haamuhuippuja ja ajautuvan perusviivan, joka voi häiritä integrointia ja kvantifiointia.
Siksi tyhjä gradientti on yksi yksinkertaisimmista veden laadun tarkistuksista. Suorita tarkka gradientti ruiskuttamatta näytettä. Jos piikit näkyvät nollakokeessa, liikkuva faasi on epäilty.
Päivittäiset tavat, jotka suojaavat veden puhtautta
Puhdas vesi ei pysy vahingossa puhtaana. Seuraavat tavat estävät HPLC-käytännön yleisimmät ongelmat.
- Käytä puhdistusjärjestelmän vettä tuoreilla patruunoilla, toimivalla UV-lampulla ja säännöllisellä desinfioinnilla.
- Kerää vesi puhtaaseen, korkkiin. Älä jätä säiliötä auki, kun järjestelmä on käynnissä.
- Älä säilytä vettä päiviä. Valmistele liikkuva faasi makealla vedellä samana päivänä aina kun mahdollista.
- Vältä makean veden lisäämistä osittain täytettyyn säiliöön. Vaihda säiliön sisältö sen sijaan, että lisäät niitä.
- Suorita tyhjä gradientti analyysissä käytetyllä aallonpituudella ja kirjaa tulos.
- Dokumentoi resistanssi, TOC ja vedenkeräyspäivämäärä analyyttisiin tietueisiisi.
Pullotettua vettä käyttäviin laboratorioihin sovelletaan samoja sääntöjä. Tarkista viimeinen käyttöpäivämäärä, sulje säiliö heti käytön jälkeen äläkä palauta käyttämätöntä vettä dekantterilasista pulloon.
Lisäaineet tekevät vesiongelmasta menetelmäongelman
Liikkuvat faasit sisältävät harvoin pelkästään vettä. Puskurisuoloja, happoja, ioniparireagensseja ja joitain erikoistuneita modifioijia lisätään suhteellisen pieninä pitoisuuksina. Jos vedessä on pieniä määriä UV-säteilyä absorboivia epäpuhtauksia, ne eivät välttämättä muuta puskurikapasiteettia, mutta ne voivat silti näkyä ilmaisimen signaalissa.
Ionisia nesteitä käytetään joskus liikkuvan faasin modifiointiaineina piikkien muodon tai selektiivisyyden parantamiseksi. Kun valitset yhden, on sovellettava samaa puhtausstandardia. Esimerkiksi 1-etyyli-3-metyyli-imidatsoliumtetrafluoriboraatti on yleinen ioninen neste kromatografisiin tutkimuksiin. Se tulee liuottaa veteen, joka jo täyttää tyypin 1 vaatimukset; muutoin lisäaineesta tulee toinen kontaminaatiolähde. Jos haluat ymmärtää näiden yhdisteiden erottamiseen liittyviä ominaisuuksia, ota yhteyttä yleiskatsaus ionisten nesteiden suorituskykyyn erotusprosesseissa kattaa käytännön muuttujat.
CAS:143314-16-3 -1 -etyyli-3-metyyli-imidatsoliumtetrafluoriboraattinesteiden toimittaja Ldet Technology on Kiinan mukautettu CAS:143314-16-3 -1 -etyyli-3-metyyli-imidatsoliumtetrafluoriboraattinesteiden toimittaja ja 1-etyyli-3-metyyli... Näytä tuote → Puhtaus alkaa toimittajasta
Zhejiang Ldet valmistaa ionisia nesteitä ja erikoiskemikaaleja. Tiedämme tuotannosta, että pienet epäpuhtaudet lähtöaineessa voivat muuttaa loppupään suorituskykyä. Siksi tarkistamme vesipitoisuuden, jäännöshalogenidit ja UV-käyttäytymisen ennen vapauttamista. Sama tieteenala kuuluu HPLC-laboratorioon: valitse materiaalit, joiden mukana tulee dokumentoidut tekniset tiedot. Esimerkiksi 1-butyyli-3-metyyli-imidatsoliumtetrafluoriboraatti on saatavilla puhtaustiedoilla, joiden avulla voit arvioida, onko se yhteensopiva tunnistusmenetelmäsi kanssa.
CAS: 174501-65-6-1-butyyli-3-metyyli-imidatsoliumtetrafluoriboraattinesteiden toimittajat Ldet Technology on Kiinan mukautettu CAS: 174501-65-6-1-butyyli-3-metyyli-imidatsoliumtetrafluoroboraatti-nesteiden toimittajat ja 1-butyyli-3-metyyli-imidi... Näytä tuote → Mitä tarkistaa analyysitodistuksesta
- Jäännöshalogenidipitoisuus, koska halogenidit voivat vaikuttaa ioninvaihtoerotukseen ja korroosioon.
- Vesipitoisuus, koska vesi muuttaa lisäaineen tehollista pitoisuutta.
- UV-spektri tai UV-raja, jotta voit ennustaa taustan absorbanssin.
- Erien välinen johdonmukaisuus, koska uuden erän ei pitäisi hiljaa muuttaa menetelmääsi.
Jos tarvitset apua materiaalin sovittamisessa menetelmään, voit tehdä sen keskustele puhtaustiedoista ja mukautetuista vaatimuksista teknisen tiimimme kanssa .
Käsittele vettä osana menetelmää
Veden puhtaus HPLC:ssä ei ole kertaluonteinen asetus. Se on päivittäinen muuttuja, joka voi muuttua vuodenajan, säilytyspullon ja puhdistusjärjestelmän kunnon mukaan. Käytä tyypin 1 vettä, vahvista TOC ja resistanssi, käsittele sitä oikein ja valitse jäljitettäviä lisäaineita. Analyytin nanogrammoille rakennetussa menetelmässä vesi ei ole koskaan "vain vettä".
